产KPC细菌检测的新方法评估
产KPC细菌检测的新方法评估
产KPC细菌检测的新方法评估 -基于培养基和MIC梯度定量试纸的组合
Evaluation of a new method for detecting KPC-producing bacteria based on the combination of a screening medium and a gradient diffusion system
介绍
碳青霉烯类抗生素常用于治疗多重耐药肠杆菌科感染。碳青霉烯类抗生素耐药性增加的机制是肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC, Klebsiella pneumoniae carbapenemase）。KPC ß-内酰胺酶最常见于肺炎克雷伯菌，但在其他种类的肠杆菌科（克雷伯氏催产杆菌、肠杆菌属、大肠杆菌属、沙门氏菌属、弗氏柠檬酸杆菌属和沙雷氏菌属）和铜绿假单胞菌中也有零星报告。
KPC酶对包括青霉素、头孢菌素、单胺菌素和大多数β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂在内的所有β-内酰胺类药物具有耐药性。KPC水解碳青霉烯类药物（厄他培南、亚胺培南和美罗培南）降低其活性，对临床患者护理和公共健康构成巨大威胁。
目标
对产KPC的临床分离株进行实验室鉴定，对于限制具有这种耐药机制的菌株的传播至关重要。试验评估了一种新的检测KPC潜在方法，先用CRE显色培养基进行筛选，然后用MIC梯度定量试纸（MTS,MIC test Strip）MTS厄他培南/厄他培南+硼酸和MTS美罗培南/美罗培南+硼酸进行确认。
方法
细菌分离株：通过分子诊断方法确定的91株具有已知耐药机制的细菌分离株（获得性ampC，MBL，KPC和产ESBL的肠杆菌科）。将所有研究的分离物在-20°C冷冻，并在Mueller Hinton Agar平板上连续培养两天，以确保培养物的纯度。
筛查培养基
美德声利飞驰系列CRE显色培养基，用来检测耐碳青霉烯的肠杆菌科细菌。所有平板在36 +/- 1°C需氧条件下孵育，在18-24小时后读取结果数，并根据说明书进行结果解释。
肺炎克雷伯菌KPC阳性
MIC梯度定量试纸
MTS厄他培南/厄他培南+硼酸是由厄他培南（8-0.125 mg/L）和厄他培南（0.032-2 mg/L）加固定浓度硼酸的双边梯度定量试纸。
MTS美罗培南/美罗培南+硼酸是由美罗培南（8-0.125 mg/L）和美罗培南（0.032-2 mg/L）加上固定浓度的硼酸的双边梯度定量试纸。
所有试纸条均接种在Mueller Hinton Agar上。孵育24小时后进行结果解释。
所有菌株均在CRE显色培养基上，并在Mueller Hinton琼脂上用MTS厄他培南/厄他培南+硼酸和MTS美罗培南/美罗培南+硼酸进行测试敏感性和特异性。
MTS厄他培南/厄他培南+硼酸和MTS美罗培南/美罗培南+硼酸
结果
产KPC的肺炎克雷伯菌在CRE上不受抑制地生长，并产生绿色或蓝色菌落（100％敏感性）。
对于不产生KPC的肠杆菌科细菌，生长不良/无生长/非典型菌落颜色很明显（特异性为77％）。
用KPC阳性和阴性菌株评估MTS厄他培南/厄他培南+硼酸和MTS美罗培南/美罗培南+硼酸。
两种测试均显示对MTS厄他培南/厄他培南+硼酸的敏感性分别为100％和89.3％，对MTS美罗培南/美罗培南的特异性分别为95.6％。
结论
研究表明，CRE显色培养基作为KPC产生菌的筛选步骤是有效的，其次是MTS厄他培南/厄他培南+硼酸和MTS美罗培南/美罗培南+硼酸作为后续验证步骤；这种结合可以快速检测对碳青霉烯类抗生素耐药的生物体，并立即实施感染控制措施，避免碳青霉烯类抗生素耐药的蔓延。